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生化检验基础知识
发布时间:2016/3/31 9:06:28 浏览量:


一临床检验与临床化学

临床检验又称实验诊断学,即通过实验室的各种检查方法,包括感官检查、理学检查、化学检查,显微镜检查以及自动化仪器检查等,对病人的血液、体液、分泌物和排泄物等标本进行检查、分析,以获得病原、病理变化及脏器功能状态等资料。

1、临床血液学检验

2、体液检验

3、临床化学检验

4、临床免疫学检验

5、微生物学检验

6、分子生物学检验

 

 

临床检验在医学中的作用

Ø 为准确诊断、及时治疗提供依据:如:肾脏有实质性损伤:尿液中出现蛋白、细胞管型   贫血(症):血中红细胞和血红蛋白量减少    白血病:  血象和骨髓象

Ø 为分析病情、观察疗效、判断预后提供依据:在疾病过程中,血液、体液、分泌物和排泄物也会随之发生相应的变化

Ø 为预防疾病提供资料,如血象和肿瘤细胞学的普查等

临床生化检验

临床生物化学,即采用生物化学分析方法,对临床标本进行定性或定量分析,以辅助临床诊断;临床生化常用的检测方法:

Ø 化学比色法:待测物经特定的化学反应生成的一定的产物,在特定波长光照下具有吸收峰,待测物的浓度与吸光度成正比,从而对物质进行定量检测方法

Ø 免疫比浊法:抗原抗体在特殊缓冲液中快速形成复合物,使反应液出现浊度。当反应液中保持抗体过剩时,形成的复合物随抗原量增加而增加,浊度亦增加。然后检测透(散)射光强度,即透(散)射比浊

Ø 离子选择性电极电位法:通过检测电极表面电位的改变,比较测定电极与参比电极表面电位变化的差值大小来计算样本中离子的含量。如,钾、钠、氯的测定

Ø 电泳法:直流电场中,带电粒子向相反电极移动,血清中的蛋白质为双性离子,在碱性环境中带负电荷,在电场中向正极移动。不同蛋白具有不同大小、分子量和电荷,带电荷多,分子量小则泳动快,反之则慢,从而将不同蛋白分离。如:血清蛋白电泳

二自动生化分析仪:

集添加试剂、注入样本、比色、计算、出报告等功能于一体,用于检测生化项目的计算机控制的自动化仪器。

国内使用的主要品牌:

日本:日立(HITACHI)  7020,7060,7080,7170,7180,7600

     奥林帕斯(OLYMPUS),AU400,640, 800,1000,2700,5400

     岛津(SHIMADZU),CL7200,8000

     东芝(TOSHIBA),TBA40FR,120FR

     希森美康(SYSMEX);180

     京都1024魅力系列

美国:雅培(ABBOTT),AerosetC8000,2000

     德灵(杜邦)(DADE BEHRING),AR,RXL,XPAND

     贝克曼库尔特(BECKMAN COULTER),CX4,5,7,9,LX20

德国:拜尔(BAYER)ADVIA1650,2400;罗氏(ROCHE)

     利霸欧宝S-600;康宁560

国内:深圳迈瑞:BS300,沈阳东软、南京英诺华

其他:荷兰的威图、意大利的BT2000/3000、西班牙的A30等。

三生化试剂(试剂盒)

生化试剂定义及应用

体液中的多数物质正常含量在一定范围,检测这些物质的含量对诊断疾病起很重要的参考价值。

  • 生化试剂(试剂盒)

指与样本(一般为体液:血液,尿液,腹水等)中的某物质发生反应的化学物质。通过反应,引起颜色(光吸收)的变化,达到测量样本该物质含量的目的。

  • 生化试剂的应用范围:

医院、疾控中心、血站(只检测ALT)、体检中心、部分保险公司的检验科。

生化试剂的发展

从性状来讲,经历了冻干、干粉、液体试剂。从单一试剂向双试剂发展,再向单试剂发展。

双试剂:存储时间长、稳定、抗干扰能力强,一般大医院都选择使用双试剂,其缺点是每个试剂需要两个试剂位。

单试剂:存储时间、稳定性、抗干扰能力均不如双试剂强,但占用的试剂位少,使用方便,特别适合小医院及小型仪器使用;如:日立7020仅有36个试剂位,如果全部使用双试剂,则只能开展18个检测项目,而医院出于临床需要及增加收益方面的考虑,希望开展的项目越多越好,因此会倾向于选择使用单试剂,而乡镇一级卫生院绝大部分都是半自动生仪,只能使用单试剂。如果把双试剂混成单试剂使用,一则比较麻烦,二则不稳定,也很浪费。

生化试剂的分类

按用途来分,主要有以下方面(本公司产品—以检测的物质命名):

肝功能

肝功常规:ALT,AST,ALP,GGT,TP,ALB,TBIL,DBIL,

发达地区医院选择性加测:TBA,AFU,AFP,ADA,CHE,GPDA,PA

肾功能

肾功常规:UA,BUN,CR

发达地区医院选择性加测:B2-MG,NAG,mALB,CSF,CYS-C

心肌酶谱

LDH,HBDH,CK,CK-MB

血脂

TG,TCH,HDL-C,LDL-C,APOA1,APOB,LP(a)

风湿三项

ASO,RF,CRP(中西部地区一般使用手工法)

血糖

GLU,GSP,HBA1C,1,5-AG,D3-H

心血管

HS-CRP,ACE

电解质

CA,MG,P,CL,CU,FE,ZN,CO2

胰腺

AMY

其他

C3,C4,IgA,IgG,IgM

按原理来分,又可以分为速率法,比色和免疫比浊法试剂。

(实际仪器应用过程中,大部分均为比色法)。

  • 比色法:试剂与样本发生反应后,生成物的颜色在特殊波长下有吸收峰,检测该生成物的量来测量样本含量,其反应曲线一般为最后趋于直线的渐近曲线,多为单点定标。基质类大都采用此法,如:TP,ALB,GLU,TB,DB,TG,TCH,CA,MG,P,FE,UA,GSP,HDL-C,LDL-C,D3-H,CSF.CO2
  • 比浊法:试剂与样本发生沉淀、凝集反应,产生浊度变化,其反应曲线一般为拟合曲线,大都采用多点定标。如,主要应用免疫比浊法试剂有:

     ApoA1,ApoB,Lp(a),ASO,RF,CRP,B2-MG,CYS-C;HBA1C,PA,mALB,AFP ,C3,C4,IgA,IgG,IgM等。

注意:

ü 方法学不同的试剂有:TBA(酶比色法/酶循环法)、CR(苦味酸法/酶法)、GLU(氧化酶法/己糖激酶法),T/D-BIL(重氮法/化学氧化法)后者测定结果更准确,对机器的污染更少,但价格也更高。

ü 有部分试剂有其他的称呼或写法,如:ALT(GPT/谷丙转氨酶)、AST(GOT/谷草转氨酶)、ALP(AKP)、GGT(γ-GT)、GSP(FMN)、AMY(AMS)、UA(URIC)

  BUN(UREA)、CR(CREA)

ü 部分试剂有简称,如ALT(谷丙)AST(谷草)ALP(碱磷酶)CYS-C(胱抑素)APOA1(载A)APOB(载B)LP(a)(小a)ASO(抗O)HDL-C(高密)LDL-C(低密)

  TB(总胆)DB(直胆)

四生化试剂临床应用

肝胆疾病的生化检测

  • 蛋白质代谢功能检查:
  • 胆红素代谢检查:
  • 胆汁酸代谢检查:
  • 摄取、排泄功能检查:
  • 血清肝酶谱的检查:

肝功老八项:ALT,AST,ALP,GGT,TP,ALB,TBIL,DBIL

ALT

0-50U/L

肝病急性期指标,急性肝炎明显升高,

其他肝病呈不同程度增高

AST

8-40U/L

病毒性肝炎,中毒性肝炎,肝硬化,肝癌增高

心肌梗塞,心肌炎时增高

ALP

成人24-92U/L

儿童35-140U/L

用于肝胆病检查,阻塞性黄疸显著升高

肝癌,肝脓肿,急慢性黄疸性肝炎以及甲亢显著升高

此外骨骼系统疾病也升高,须鉴别

γ-GT

8-50U/L

肝癌,酒精性肝炎,梗阻性黄疸,

黄疸性肝炎均有不同程度的升高

TP

60-82g/L

肝病、肾病综合症时下降;

脱水时Ig上升,TP上升;

TP-ALB=GLB,肝硬化球/白<1

ALB

35-55g/L

肝硬化时显著下降;

慢性肝炎、营养不良、肾病综合症时下降;

脱水、免疫系统疾病、炎症、传染病时上升。

TBIL

3-18μmol/L

肝细胞黄疸、溶血性黄疸、阻塞性黄疸时显著上升。

DBIL

1-8μmol/L

总胆-直胆=间胆,阻塞性黄疸,总胆、直胆均升高;

溶血性黄疸间胆升高,直胆不高。

肝功新八项:AFU,AFP,PA,NAG,ADA,TBA,5’-NT,GPDA

AFU

12-40U/L

肝癌的特异性指标,能弥补AFP的不足(假阴性)。

AFP

0-20ng/ml

肝癌的特异性指标,也可作肝细胞大面积坏死的指标。

PA

250-400mg/L

肝病PA变化较ALB要早,急性肝炎起病一周内PA下降

恶性肿瘤;营养不良的评估。

NAG

9.5-29.9U/L

各种肝病均有升高(指血清中的NAG)

重点:慢性肝炎、肝硬化阳性率>85%

ADA

血清0-15U/ L

胸腹水0-35U/L

脑脊液  0-5U/L

与ALT同时升高,慢性肝炎、肝硬化时,阳性率90%;

结核性胸腹水其活性显著高于癌症和炎症的;

CSF的ADA含量,结核性脑膜炎升高,病毒性不高。

TBA

0-12U/L

升高常见于:急、慢性肝炎,中毒性肝病,肝硬化,淤胆。

5’-NT

2-11.4U/L

肝、胆阻塞性疾病的诊断

GPDA

44-116U/L

原发和继发性肝癌升高,鉴别肝脏的良、恶性病变

肾脏疾病的生化检测

Ø 肾小球功能检查

l 肾小球滤过率

l 肾清除率

Ø 肾小管功能试验

l 肾浓缩稀释试验

l 尿渗量(渗透压)测定

l 尿液酶的测定

CR

男   44-97 umol/L

女   35-80 umol/L

仅反映肾小球的滤过率,急、慢性肾小球

肾炎;急、慢性肾功能不全。

BUN

1.43-7.14mmol/L

增高:急、慢性肾炎,肾病综合症,肾衰

竭。

UA

男210-420 umol/L

女150-350 umol/L

肾病中、晚期,痛风,白血病时增高;

多发性骨髓瘤时增高。

NAG(尿)

一次性尿液

0.3-12U/L

肾小管标记酶,反映早期肾损伤。

CYS

0-0.5mg/dL

作为一项测定肾小球滤过率的指标。

β2-MG

血清1.0-3.0mg/L

尿液0.1-0.3mg/L

测血清或尿中β2-MG的含量,

鉴别肾小球与肾小管性疾患。

CSF/UTP

8-43mg/dL

28-141mg/天

(脑脊液蛋白/尿蛋白)

此二者是鉴别肾病的重要指标。

m-ALB

(尿)

0-25.0mg/L

 早期肾损伤检测和追踪的重要生化指标。

血清脂类及脂蛋白生化检测

  • 血浆脂类:总胆固醇(即游离胆固醇(FC)和胆固醇酯(CE));磷脂(PL);甘油三酯(TG)、糖脂和游离脂肪酸(FFA)等
  • FFA与Alb结合,血浆脂类以脂蛋白复合体的形式(包含在脂蛋白中)存在;
  • 血浆脂蛋白分类:CM、VLDL、IDL、LDL、HDL和Lp(a

CHO

3.1-5.3 mmol/L

增高:原发性高胆固醇血症、动脉粥样硬化、肾病综合症。

TG

0.4-1.7mmol/L

增高:脂肪肝、阻塞性黄疸、动脉粥样硬化、高脂血症等

HDL-C

0.7-2.0mmol/L

抗A硬化因子,下降:常见于脑血管病,冠心病

LDL-C

2.0-3.2mmol/L

增高:A硬化,冠心病。

Lpa

0-300mg/L

独立于所有其他参数和外源性因素,是冠状动脉粥样硬化的危险因子

APOA1

男1.05-1.75g/L

女1.05-2.05g/L

同  HDL-C

APOB

男  0.60-1.40g/L

女  0.55-1.30g/L

同   LDL-C

血糖检测项目

GLU     3.89-6.11mmol/L   血糖调节失去平衡,出现高、低血糖症状

  高血糖(>11.1mmol/L)称糖尿病,其他内分泌疾病引起各种对抗胰岛素的激素分泌过多,也会出现高血糖。

GSP     1.70-2.50mmol/L能反应出病人1-2周的血糖平均水平(尤其II型糖尿病)。

D3-H    0.03-0.3mmol/L    用于诊断酮症酸中毒。

HbA1c    3.8-5.8%    反映1-3个月平均血糖水平,用于糖尿病病人的普查,及

糖尿病人血糖的控制。

心肌酶检测项目

LDH    109-245U/L 心肌损伤会引起LDH显著增高;判断白血病的疗效和预后。

HBDH    111-199U/L        增高:急性心肌梗死。

CK      27-184U/L        增高:心肌梗死,肌肉损伤性疾病。

CK-MB    0-12U/L         增高:急性心肌梗死。

 

电解质、离子类检测项目

Ca

成人1.9-2.5mmol/L

儿童2-2.8mmol/L

钙低:佝偻病,骨软化症,钙吸收不良;钙高:甲亢,多发性骨髓瘤,代谢性酸中毒

Mg

0.7-1.1mmol/L

增高:肾功能不全,关节炎,肺部疾患,脱水降低:酸中毒,甲亢,急性胰腺炎,肝硬化

Cu

男11.0-22.0umol/L

女12.5-24.0umol/L

增高:心梗,肺心病,低血氧,精神病;降低:动物蛋白摄入不足,骨、神经、肌肉发育不全,Wilson病等。

Zn

男10.8-19.4umol/L

女10.7-17.5umol/L

健康监护指标,<15.4umol/L,可补锌。

Fe

13.4-35.7mmol/L

增高:红细胞增多症,肝细胞损伤;降低:缺铁性贫血。

Cl

96-110mmol/L

吐、泻,长期低盐,营养不良,肾病,脑膜炎时低Cl。

CO2

22-34 mmol/L

其变化主要反映代谢性酸碱平衡的混乱。

风湿三项检测项目

ASO

成人0-160IU/L

儿童0-200IU/L

作为链球菌感染诊断和监测,相关疾病如:风湿热,肾小球肾炎,丹毒,扁桃体炎等。

RF

0-30IU/mL

类风湿性关节炎。

CRP 

0-6.0mg/L

急性时相蛋白,可用于鉴定急性炎症,外科损伤的存在,自身免疫或免疫复合物病,组织坏死,恶性肿瘤的存在。

胰腺炎检测项目

AMY

<200U/L

急性胰腺炎

 

五临床生化检验常用质量评估指标

1空白吸光度:水空白,试剂空白,样本空白,空白速率

(1)试剂空白:影响Kit的线性范围和灵敏度,故在试剂盒评价时最常用的空白指标;

按反应方向,试剂空白(R1+R2)有不同评判标准:

向上反应:试剂空白吸光度越低越好;如. GLU,规定,试剂空白≤0.2

向下反应:试剂空白吸光度越高越好;如. BUN,一般要求Ao>1.0

u 若在储存和运输过程中超过规定温度达一定时间,此值极有可能超过规定的范围。

(2)空白速率:速率法的试剂因为某些成份自己会发生较缓慢的变化,用水作样本时也会发生吸光度的变化,其变化率即空白速率.空白速率越低越好

u 如果用质量差的工具酶或底物,或环境不洁,此值极有可能超过规定的范围。

2  PH控制

(1)PH值直接影响呈色,如ALB的颜色控制,就得在PH=4.15的酸性环境下,如果控制不准,将无法正常显色。

(2)PH影响酶活性,由于酶反应都会有一个最适PH,因此PH的控制对保持酶活力也至关重要。

3准确度

是指测定结果与真值(或靶值)接近的程度。常用两种方法:

(1)标准物判定:用质控高、低值分别用该Kit测定,如值在其靶值的±10%之内,则判定准确度合格。

(2)回收实验:向任意标本加入一定量,测理论值和实测值之比,范围95%-105%为合格。

4精确度

即重复性,指对同一样本重复测定时,每次测定结果与平均值的接近程度,即重复测定值之间的符合程度;

  用测值的平均值,求出SD;SD/X=CV%。,CV值愈小,精密度愈好。

5  线性

(1)线性范围:能准确测出的极限高值;

 实施方法:准备一份高值样品(其值略超出预计的线性上限),然后倍比稀释成5点或7点,标出理论值,测出实测值,做回归方程,求r2 ,要求r2 >0.995%。

(2)线性低值:即方法的分析灵敏度。

1)用检测下限的形式表示,即能够与零浓度区分的最低的可以准确测定的浓度。eg.GGT的分析灵敏度为3U/L。

2)用标准物的吸光度或着吸光度变化率表示。eg BUN分析灵敏度为△A/min=0.043 (7.14mmol/L)

6干扰试验

指在测某物浓度时,受到非目标的影响,导致结果偏高(正干扰)或者偏低(负干扰)。

 干扰物影响的大小有一个允许范围,可从有关文献中查到。超过范围的干扰存在,Kit不能上市。

  • 干扰物的分类

(1)内源性干扰:

  标本固有的:如测TG中的FG;酶法测Cr的血清中肌酸。

  病理生成的:胆红素,脂类,某些治疗药物如VitC等。

(2)外源性干扰:如抗凝剂、防腐剂、器皿和工具的污染、试剂中杂质和杂酶。

日常最常见的干扰:黄疸(胆红素)、脂血和溶血(血红蛋白Hb)

7稳定性试验

37℃ 加速稳定性:七天视为2-8℃一年;

2-8℃开口稳定性:如瑞源CO2,可开口稳定2周以上

8方法学比较

(1)可选用公认的推荐方法及权威参照对象进行有效比较;

(2)样品应新鲜,数量至少要40份。且有足够的,适合比例的浓度范围(正常值和异常值)。

9试剂盒包装规格及价格

(1)包装规格考虑配合客户所需的机型及标本量使用,避免试剂的富余浪费(试剂比例),且应最大程度方便客户使用;(条形码试剂)

(2)测试量T:与试剂ml价格密切相关;

(3)质控品及标准品的溯源,保质期,报价?